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簡(jiǎn)要描述:油紅O為脂溶性染料,在脂肪內(nèi)能高度溶解,可特異性的使組織內(nèi)甘油三酯等中性脂肪著色,油紅O脂肪染色法指在日常病理診斷和科研工作中為了顯示組織內(nèi)的脂肪常采用油紅O進(jìn)行染色的方法。
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油紅O染色是鑒定間充質(zhì)干細(xì)胞向成脂細(xì)胞分化的一個(gè)重要指標(biāo)。用特定的成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基(貨號(hào):CTCC-JD003)培養(yǎng)一段時(shí)間后 ,間充質(zhì)干細(xì)胞可分化為成脂細(xì)胞,并在細(xì)胞中形成脂滴。油紅O屬于偶氮染料,是很強(qiáng)的脂溶劑和染脂劑,與甘油三酯結(jié)合呈小脂滴狀。脂溶性染料能溶于細(xì)胞中的脂滴。當(dāng)染料加入細(xì)胞中,染料則離開染液而溶于細(xì)胞內(nèi)的脂滴中,使細(xì)胞內(nèi)的脂滴星紅色或橘紅色。
油紅O工作液制備:
油紅染色液與染色稀釋液按照3:2的比例進(jìn)行稀釋,混勻后室溫靜置10min,濾紙過濾;
移除孔內(nèi)培養(yǎng)基,每孔加入2ml洗滌液1號(hào)靜置1min后移除,洗滌2次;
每孔加入2ml固定液,37°C (或室溫)固定30min ;
移除固定液。每孔加2ml洗滌液1號(hào)沖洗,洗滌2次;
每孔加入油紅O工作液2ml,37°C (或室溫)染色10-20min ;
每孔加入洗澡液3號(hào)2ml,快速移除,根據(jù)染色背景情況可重復(fù)1-2次;
每孔加洗滌液2號(hào)2ml,洗2次后顯微鏡下觀察。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:脂滴呈橘紅色至鮮紅色,細(xì)胞核呈深藍(lán)色。
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