簡要描述:染色質免疫共沉淀CHIP實驗的原理是在活細胞狀態(tài)下固定蛋白質-DNA復合物,并將其隨機切斷為一定長度范圍內的染色質小 片段,然后通過免疫學方法沉淀此復合體,特異性地富集目的蛋白結合的DNA的片段,通過對目的片斷的純化與檢測,從而獲得蛋 白質與DNA相互作用的信息。
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實驗原理:
在保持組蛋白和DNA聯(lián)合的同時,染色質被切成很小的片斷,通過運用對應于一個特定組蛋白標記的生物抗體,將目標片段(組蛋白發(fā)生特異標記的片段)沉淀下來。ChIP是利用抗原和抗體的特異性結合以及細菌蛋白質的“protein A”特異性地結合到免疫球蛋白的Fc片段的現象合用開發(fā)出來的方法(免疫磁珠結合proteinA,proteinA結合抗體Fc段,抗體結合抗原即發(fā)生特異標記的組蛋白,這里要注意組蛋白是和DNA結合的,這樣就把目標組蛋白和DNA的復合體沉淀下來了)。再將組蛋白與DNA分離,用獲得的DNA去做PCR分析和序列測定等檢測技術,從而進一步檢測哪些基因的組蛋白發(fā)生了修飾。
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