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簡要描述：過表達慢病毒構(gòu)建及包裝實驗：慢病毒（Lentivirus）載體是以 HIV-1 （人類免疫缺陷1型病毒）為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因治療載體。具有感染譜廣泛、可以有效感染分裂期和靜止期細胞、長期穩(wěn)定表達外源基因等優(yōu)點，因此成為導(dǎo)入外源基因的有力工具。現(xiàn)在慢病毒系統(tǒng)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用到各種細胞系的基因過表達、RNA干擾、microRNA研究以及活體動物實驗中。
更新時間：2022-12-22瀏覽次數(shù)：878相關(guān)文章
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1 、過表達慢病毒構(gòu)建及包裝實驗特點：
1.1 直接包裝成為假病毒顆粒，對分裂和非分裂細胞均有感染作用，適合RNAi研究和體內(nèi)實驗中難于轉(zhuǎn)染的細胞 (比如神經(jīng)元細胞、干細胞或其它原代細胞)。
1.2 可以通過簡單方式，在短時間內(nèi)獲得穩(wěn)定表達特定基因的多種細胞株。
1.3 可用于基因敲除、基因**和轉(zhuǎn)基因動物研究。
1.4 無需轉(zhuǎn)染試劑，操作簡便。
1.5 可以根據(jù)客戶需要制備多種標(biāo)記。
2、過表達慢病毒構(gòu)建及包裝實驗原理：
慢病毒（Lentivirus）是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種。構(gòu)建的siRNA / miRNA慢病毒載體，與化學(xué)合成的siRNA和基于瞬時表達載體構(gòu)建的普通siRNA載體相比，一方面可以擴增替代瞬時表達載體使用，另一方面，Lentivirus-siRNA克隆經(jīng)過慢病毒包裝系統(tǒng)包裝后，可用于感染依靠傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑難于轉(zhuǎn)染的細胞系如原代細胞、懸浮細胞和處于非分裂狀態(tài)的細胞，并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組，進行長時間的穩(wěn)定表達。
3 、過表達慢病毒構(gòu)建及包裝流程：
3.1 含有目的基因的慢病毒表達載體的構(gòu)建和質(zhì)粒純化提取。
注：客戶也可以提供構(gòu)建好的重組慢病毒表達載體。
3.2 慢病毒表達載體與包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染病毒包裝細胞。
3.3 收集病毒液。
3.4 純化和濃縮病毒。
3.5 分裝、- 80 oC保存。
3.6 滴度測定及無菌檢測。
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